解密4種定量測試方法，你知道哪種？

定量測試方法主要應(yīng)用于藥物、食品、化工等行業(yè)，用于定量測定某一特定物質(zhì)或多種物質(zhì)。在選擇物質(zhì)定量分析方案時(shí)，需要考慮多種關(guān)鍵因素，如樣品體系、目標(biāo)物的性質(zhì)、樣品矩陣、靈敏度和檢出限、準(zhǔn)確度和精密度、分析速度和成本，操作難度等。以上因素眾多，故選擇合適的定量分析方法尤其重要。

定量是指利用檢測器的響應(yīng)信號(hào)（色譜，光譜峰面積或峰高）與待測組分的量（質(zhì)量或濃度）成正比定量。

有機(jī)目標(biāo)物定量可按照下圖選擇定量方案：

儀器方案定好后，為了定量更準(zhǔn)確，還需要選擇一種或多種適合目標(biāo)化合物定量分析的方法，在實(shí)際操作中，最好對比不同方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。

常見的定量分析方法有：歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、標(biāo)準(zhǔn)加入法等。

一、 歸一化法

將所有出峰組分的含量之和按100%計(jì)的定量方法，稱為面積歸一法。

歸一法使用時(shí)需要滿足三個(gè)條件

1、樣品中所有組分都能從色譜柱流出

2、所有組分都能被檢測器檢出

3、能測定或查出所有組分相對校正因子

各組分含量的計(jì)算公式如下：

式中：C：含量    F：校正因子   A：表示峰面積

若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，當(dāng)樣品中組分是同分異構(gòu)體或同系物，Fi都很相近。

在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：

案例1 ： 當(dāng)樣品主成分含量大于50%面積歸一定量結(jié)果如下圖

圖2 丙酮GC-FID純度分析

外標(biāo)法又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線法。取待測組分的純物質(zhì)配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，繪制峰面積與標(biāo)樣含量的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并擬合二者的線性方程式。

在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：

案例2：目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)品，用外標(biāo)法定量時(shí)結(jié)果如下圖

圖3 測樣品中對二甲苯的準(zhǔn)確含量，上圖為標(biāo)準(zhǔn)曲線

目前微譜已經(jīng)積累的成熟外標(biāo)定量方法見表1

表1 化合物外標(biāo)法定量典型案例表

選擇適宜的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，準(zhǔn)確稱量后加入待測樣品中，根據(jù)組分和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值以及內(nèi)標(biāo)加入量進(jìn)行定量。

在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：

標(biāo)準(zhǔn)加入法又稱疊加法，實(shí)際是一種特殊的內(nèi)標(biāo)法。以待測組分的純物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物，加入到待測樣品中，然后在相同的色譜條件下，測定加入內(nèi)標(biāo)物前后待測組分的峰面積，從而計(jì)算待測組分的含量。

在計(jì)算時(shí)通常采用公式如下：

標(biāo)準(zhǔn)加入法每一個(gè)樣品都要配制三個(gè)以上的、含樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的混合溶液，因此，這種方法不適于大批樣品的分析。在難以找到合適內(nèi)標(biāo)物時(shí)，可作為內(nèi)標(biāo)法的一種延伸。

定量分析要求目標(biāo)組分都必須分離，能被檢測器檢測到，并且濃度在檢測器的線性范圍內(nèi)，不同方法適用于不同要求。

圖5 定量方法選擇導(dǎo)圖